バイオビルダー ―合成生物学をはじめよう

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2.

形質転換に必要な各々の株に対してその手順を繰り返す。

3.

プレートを培地が上になるようにしてインキュベーター内に入れて、

37

℃で一晩

培養する。

実験演習のプロトコル

［57］

1.

2

つの小さなマイクロチューブに「

4-1

」、「

4-2

」と書く。

2.

CaCl

2

（塩化カルシウム、

Calcium Chloride

）

形質転換溶液をマイクロピペットで

200

μ

l

採取し、各々のチューブに入れ、氷の上に置く。

3.

滅菌済の爪楊枝あるいは接種ループを使って、「

4-1

」のマス目ひとつ分の細胞を

すべてかき取る

（寒天までかき取らないように注意！）

。そして、冷えた塩化カルシウム

入りの対応するチューブに細胞を入れてかき混ぜる。寒天が少し混入してしまっ

ても実験に影響はない。もしボルテックスミキサーが使えるなら、細胞の入った

チューブを

1

分間ボルテックスミキサーにかけて懸濁する。もし使えないようなら、

チューブを軽く指先ではじいて転倒混和する。

4.

新たな滅菌済の爪楊枝を使って、「

4-2

」のマス目ひとつ分の細胞をすべてかき取

り、以前のステップを繰り返す。可能なら少しの間ボルテックスミキサーで攪拌

する。この溶液中に細胞の塊が少し残っても大丈夫である。

5.

形質転換のためのプラスミドの準備をしている間、これらのコンピテントセルは

氷の上に置いておく。

6.

合計

4

つのサンプルを作るために

（

2

×紫生成デバイスのプラスミド

pPRL

、

2

×緑生成デバ

イスのプラスミド

pGRN

）

、各々のプラスミドからアリコート

（一定分量）

を

2

つずつ取

り出し、マイクロチューブに分注する。各々のアリコートには、

5

μ

l

のプラスミド

DNA

が含まれている。

DNA

の濃度は、

0.04

μ

g

／μ

l

である。この実験の終わりに形

質転換効率を計算するにあたって、これらの値は必要となる。 ...